真菌毒素检测&大豆抗营养因子检测&兽药残留
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真菌毒素检测方法的更新和迭代进程

发布时间:2022-03-30 15:56 作者:龙科新域
随着真菌毒素检测方法和分析技术的发展,人们发现真菌毒素几乎广泛存在于所有的食品和饲料中,所以,食品中的真菌污染尤其应引起重视。本文简述了真菌毒素的致病机理,重点介绍了目前检测真菌毒素的各种有效方法及其研究进展。
真菌毒素检测
真菌毒素(Mycotoxin)是真菌产生的次级代谢产物,目前已知有200多种不同的真菌毒素。研究较为深入集中在十几种对人类危害较大的真菌毒素上,它们一-般同时具有毒性强和污染频率高的特点,其中包括黄曲霉毒素,主要是黄曲霉毒素Bi和Mi(aflatoxins,AFBI、AFM1);赭曲霉毒素A(ochratoxinA,OTA); 伏马菌素(fumonisins,F); 展青霉素(patulin, PTL);玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEN);串珠镰刀菌素.(moniliformin,MF);脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON);橘霉素(citrinin, CIT); 单端孢霉烯族毒素(trichothecenes, TS)等。由于真菌的寄生和真菌毒素的产生,严重影响农作物的产量,降低农产品和饲料的品质,造成巨大的经济损失。据悉,全世界每年由于霉变、污染真菌毒素引起的农产品和工业原料的损失达数百亿美元。近年.来,随着生活质量的提高,无公害食品的普及,为保障公众健康,加强粮食及其制品中的真菌毒素的监测已经成为国内外学者研究的热点。
真菌毒素的检测方法很多,概括起来有生物鉴定法、化学分析法、仪器分析法和免疫分析法等。

2.1真菌毒素检测生物鉴定法

生物鉴定法是利用真菌毒素能影响微生物、水生动物、家禽等生物体的细胞代谢来鉴定真菌毒素的存在。其方法专- -性差,灵敏度低,一般只 作为化学分析法的佐证。其特点是待检样品不需很纯,主要用于定性,共有10种: (1)抑菌试验; (2)对微生物遗传因子影响试验; (3)细菌发光试验; (4)荧光反应; (5)组织培养检测法; (6)鸡胚试验; (7)鸭胚试验; (8)鱒鱼试验; (9)植物试验; (10)饲喂实验动物试验。

2.2真菌毒素检化学分析法

最常用的为薄层层析法(TLC),适用于粮食及其制品、调味品等真菌毒素的检测,主要是半定量。Cvetnic Z和Hadiani M R(2I等分别用TLC法分离和鉴定伏马菌素和黄曲霉毒素,取得了良好的效果。

2.3真菌毒素检仪器分析法

高效液相色谱法(HPLC)是20世纪70年代发展起来的一种以液体为流动相的新型色谱技术。近年来,高效液相色谱已成为现代仪器分析中应用最广泛的一种方法。其高分离效能,高检测效能,分析快速,为同时测定多种真菌毒素提供了条件。李军等IP]应用HPLX法,检测谷物中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素,检测限分别为黄曲霉毒素0.24ug/kg,玉米赤霉烯酮4.0mg/kg和赭曲霍毒素0.5mg/kg。此外,与质谱联用,还可大大提高分析的灵敏度和可靠性。毛细管电泳技术是20世纪80年代发展起来的-种新型液相分离技术。它融合了HPLC和常规电泳两项技术的优点,具有快速、自动化、可有效分析复杂成等特点。曾红燕等141建立了粮食样品中玉米赤霉烯酮及其代谢物的毛细管电泳测定方法,玉米赤霉烯酮、黄曲霉B1、赭曲霉A的检出限分别为: 0.0084、 0.081、 .0.14、0.0016、 0.031ug/m1.样品加标回收率77.9%~103.1%,相对标准偏差0.63%~1.98%。该法灵敏、准确,可用于粮食样品中玉米赤霉烯酮等真菌毒素的测定。Maragos C M等I51建立的玉米中玉米赤霉烯酮的毛细管电泳方法,检测限可达到5ng1g。
 

2.4真菌毒素检免疫分析法

真菌毒素属于半抗原,抗原性弱。检测食品中的真菌毒素常用理化方法或生物学方法。但理化法需要较昂贵的仪器设备,操作复杂。而用真菌毒素单克隆抗.体检测真菌毒素敏感性高、特异性强,非常适用于食物样品的检测。这种方法是利用免疫、酶及生化技术,开辟了真菌毒素分析的新领域。目前应用的方法有放射免疫法、亲和层析法和酶联免疫法。放射免疫法特异性强、灵敏度高、比较准确迅速、操作简单、易于标准化;但也有严重的缺点,特别是需要持殊的设备和安全保护,妨碍了更广泛的应用。Offiah N等161采用放射免疫的方法检测了438份样品中的黄曲霉毒素,其中包括花生、牛奶及其制品等。黄曲霉毒素的检出率为.4.1%。亲和层析法是利用免疫化学反应原理,采用大剂量的单克隆抗体,选择性吸附提取液中的抗原物质。由于抗原-抗体反应具有高灵敏、高选择、高特异性等特点,从而大大提高了试样的净化效果及检测灵敏度,同时可显著减少有毒有害试剂的使用,十分有利于操作人员的健康和环境保护。Aksenov I V等[71将免疫亲和层析法与荧光-HPLC法联用,检测限提高至0.5mg/kg,优化了赭曲霉毒素的检测方法。

2.5真菌毒素检生物芯片分析法

生物芯片是近十几年来在生命科学领域迅速发展起来的一项高新技术,是一-项基于基因表达和基因功能研究的革命性技术,它综合了分子生物学、半导体微电子、激光、化学染料等领域的最新科学技术,在生命科学和信息科学之间架起了一道桥梁, 是当今世界上高度交叉、高度综合的前沿学科和研究热点。胡娜[8]采用基因芯片技术检测黄曲霉菌产毒前后产毒相关基因的差异表达情况,发现部分相关基因产毒前后表达差异明显。Tudos 等[91将酪蛋白与小麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)共价连接制成人工抗原固定在芯片上,通过检测溶液中的DON抗体与固相抗原结合以SPR技术检测反应信号,构建了可以对DON进行定量分析的免疫微阵列,最佳检测限范围为2.5~30ng/ml,检测结果与使用气质联用(GC-MS)检测相一-致。生物芯片技术具有传统的检测方法不可比拟的优点:高通量、多参数同步分析:全自动、快速分析:高准确度、灵敏度分析。利用抗体芯片技术检测真菌毒素,可以实现多种真菌毒素以及其它危害化学品的同时监测,大大缩短样品提取和检测时间,提高工作效率。虽然抗体芯片研究还处在初期发展阶段,但我们相信随着其不断深入发展,抗体芯片技术一定会在食品安全领域中发挥出巨大的作用。目前生物芯片正在成为监督食品的卫生、安全和食品质量和保证人类健康的一种较新的方法,并且将对整个食品领域产生深刻的影响。

科学在进步,时代也在进步,在真菌毒素检测领域也涌现出了一批批的高精人才,在真菌毒素检测行业中夜以继日的不断前行,也许明天就回出来更加先进便捷的方法,都是无数科学家和业界从业人员的不断努力,为我们人类的健康不断创新,在这里我们要感谢他们
 

最后更新时间:2022-09-15 13:14:32

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